革兰氏染色法(Gramstain)是由丹麦医师革兰（Gram）氏于1884年所创立，当时发现革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次较多且交联致密，经革兰氏染色后能将结晶紫与碘的复合物牢固留在壁内，不容易被脱色液脱掉而仍呈紫色，在此基础上形成了革兰氏染色液试剂。

 

    革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法（属复染法），可用于标本涂片或菌落涂片，染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以临床分类鉴定。染色结果将细菌分为革兰氏阳性菌（紫色）和革兰氏阴性菌（红色）两大类。

 

    革兰氏染色液试剂可以缩短染色时间，通常整个染色过程只需1分钟，而且几乎没有伪阴性情况发生，是目前临床检验微生物实验室的较佳选择。

 

    【革兰氏染色液产品用法】

 

    1.涂片经火焰固定，加（结晶紫溶液）溶液A染1分钟，用清水冲去染液。

 

    2.加（碘液）溶液B染1分钟，水洗。

 

    3.加（95%乙醇）溶液C，不时摇动玻片约10-30秒，至无紫色脱落为止，水洗。

 

    4.加（沙黄复染液）溶液D，染1分钟，水洗。

 

    5.干后油镜镜检。阳性菌呈紫色、阴性菌呈淡红色。

 

    【革兰氏染色液使用注意事项】

 

    1.该该染色液仅用于体外诊断。

 

    2.涂片厚薄要均匀，自然干燥后再加热固定。

 

    3.复染的时间不能太长，这样很容易将阳性菌染成阴性菌。

 

    4.所用标本应视为具有传染性物质。

 

    5.由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。

 

    6.培养基有天然、人工两种革兰氏染色液一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2～7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

 

    【检验结果的解释】

 

    在显微镜下观察染色结果：

 

    A　在显微镜下观察到紫色或深紫蓝色菌落为革兰氏染色阳性菌。

 

    B　在显微镜下观察到红色或粉红色菌落为革兰氏染色阴性菌。

 

    【检验方法的局限性】

 

    有些细菌有染色嗜变性，不一定*是染色原因，应根据菌体形态加以确定。

 

    【革兰氏染色液的保存】

 

    1）干粉，买了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我认为没有必要。但4度是非常必要的。保证期是有提示的。

 

    2）配好的无血清培养基一定保存在4度，保存不要超过3个月。用时根据提示要加入谷胺酰胺。

 

    3）加入血清的培养基，保存在4度不要超过1个月，从时间太长，活性下降。当然稍微长点也不一定出问题。但是根据细胞而定;如果原代培养，新鲜，如果是肿瘤细胞，或仅维持传代就不太要紧，但是原则是越新越好。