细菌鞭毛为细菌的运动器官，主要成分是蛋白质。其形态细长，直径约10-20nm，需用电子显微镜才

能观察到。所以鞭毛染色时先经媒染剂处理，使鞭毛增粗，然后再进行染色，则可在普通光学显微镜下观

察。

 

操作步骤：

取鞭毛染色液A 液9 份和 B 液1 份混合配成工作液，现用现配，建议过滤后使用。

(1) 细菌标本制备：变形杆菌接种于琼脂平板，37℃培养18-24h，仔细从菌膜迁徙生长的边缘处挑取

菌体少许，轻轻放入无菌蒸馏水试管中，经数分钟使其自行分散，再37℃放置约10min。

(2) 涂片：取上述菌液一接种环，轻轻滴于载玻片上，使成薄膜。涂抹时接种环随水滴移动，切勿与

玻片相磨，以免鞭毛脱落。

(3) 染色：涂片自然干燥(勿用火焰固定)后，滴加鞭毛染色液数滴覆盖菌膜，染色5-10min ，水洗、

吸干、镜检。

 

【预期用途】：用于抗酸性细菌的染色。

 

【检验原理】：由于抗酸性细菌具有抗酸性，在被含石炭酸的复红液染色后结合牢固，不易被酸性脱色液脱色，终染色为红色。而非抗酸性细菌在被含石炭酸的复红液染色后结合不牢，容易被酸性脱色液脱色，经复染后终显微镜下显示为蓝色或无色。

 

【储存条件及有效期】：15℃~30℃，避光。有效期365天。

 

【适用仪器】：光学显微镜

 

【样本要求】：选择能反映活动病程有临床价值的标本或培养物。

 

【检验方法】：

 

a) 将标本制成薄涂片，或者以接种环挑取新鲜菌落与生理盐水充分混匀制成薄涂片（若为液体菌液，挑取2～3环直接涂抹即可），自然干燥，火焰固定，滴加石炭酸复红液覆盖涂片染色5~8分钟，水洗；

 

b) 滴加硫酸美兰液覆盖涂片染色，脱色5~8分钟，水洗；

 

c) 待凉干后，显微镜下油镜检查。背景淡蓝色或无色。

 

【参考值（参考范围）】：阳性为光学显微镜油镜（10×100）下见有红色杆状菌，反之为阴性。

 

【检验结果的解释】：阳性为光学显微镜油镜（10×100）下见有红色杆状菌，反之为阴性。

 

【检验方法的局限性】：对阳性结果不能区分是强抗酸菌还是弱抗酸菌，需要用强抗酸染色液染色做对比予以确认。

 

细菌染色液使用体会和说明：

 

1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。

 

2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。

 

3、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

 

4、染色时用已知的阳性片同染作对照。