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使用巴氏染色液后结果不理想的原因有哪些?
发布时间:2019-11-13   点击次数:1795次
   巴氏染色液染片胞浆、胞核、胞膜清晰、易辨,红蓝相间。进口原料配制,染液的稳定性好,无嗅、无味、无刺激、吸附性强、不脱色,对涂片无特殊要求。研制的改良巴氏染液染色全程只需要5分钟,改良巴氏染液染色全程只需要3分钟,且步骤简单,只需初染—复染—增色三步,省时、准确、操作简便,即来即检,立等可取检查结果,无需梯度酒精脱水,二甲苯透明,可直接封片保存。
  
  检验原理:
  巴氏染色液中有苏木素、橘黄、伊红、俾士麦棕及亮绿等染料,其中苏木素能与细胞核的核酸结合而显紫蓝色,其他染料可以与细胞浆中不同的化学成分结合而显颜色。
 

  
  使用方法:
  
  1.将涂片置于95%乙醇中固定15分钟以上;
  
  2.依次浸入80%、50%乙醇中各30秒,水洗1~2分钟;
  
  3.浸入苏木精染液中3~5分钟,水洗1~2分钟;
  
  4.浸入盐酸酒精分化液中分化数秒,水洗1~2分钟;
  
  5.浸入返蓝液中数秒,水洗1~2分钟;
  
  6.置于95%乙醇中漂洗,水洗甩干;
  
  7.浸入橘黄G染液染中1~3分钟;95%乙醇漂洗、95%乙醇漂洗、100%乙醇漂洗各一次,时间各10~20秒;
  
  8.浸入EA36染液(或EA50染液)中染色2~5分钟,95%乙醇漂洗、95%乙醇漂洗、100%乙醇漂洗各一次,时间各10~20秒;
  
  9.浸入浸蜡脱蜡透明液中2分钟;
  
  10.中性树胶封固;
  
  11.镜检。
  
  染色结果:
  
  上皮细胞:胞核呈紫蓝色,核仁红色;胞质受色随分化程度和细胞类型不同可染成蓝绿色、粉红色或桔黄色;红细胞:鲜红色或橙红色。白细胞:胞核蓝紫色,胞质淡蓝或淡绿色;粘液:淡蓝或粉红色。
  
  使用巴氏染色液染色结果不理想原因分析:
  
  1、细胞核着色不佳
  
  (1)细胞核着色过浅:
  
  盐酸分化时间过长或苏木素染液时间过长。需要缩短分化时间或延长碱化时间;每日加入少量新鲜苏木素染液或重新配制苏木素液。
  
  在固定之前制片干燥。所以对巴氏染色的制片需要严格遵守湿固定的原则。
  
  自来水的PH值偏酸性。使用碱性溶液。
  
  (2)细胞核着色过深:
  
  盐酸溶液浓度不够。适当加入几滴盐酸以增加浓度。
  
  制片用高于95%以上浓度的酒精固定后可以出现染色过深。应用95%酒精固定。
  
  2、细胞浆着色不佳
  
  (1)如果全片内胞浆都淡染,则需要延长染色时间或更换新液。
  
  (2)如果胞浆不分色,均为浅红色。制片在固定前干燥或制片被有大量球菌样细菌影响胞浆染色。此情况可以适当增加染色时间能够部分纠正不分色状况。
  
  (3)胞浆染成灰色或紫色,是由于苏木素染色时间过长或盐酸分化不佳。经过褪色后重新苏木素可以纠正。
  
  (4)由于标本的不同,同样配方的EA染液可造成偏蓝、偏绿和偏红,对不同的标本应该使用不同的EA染液。一般认为,EA36和EA50用于妇科标本,而EA65或改良EA用于非妇科标本。
  
  (5)胞浆不分色的另一重要原因是由于EA染液的PH值不恰当所致。如染色为红色,可以加少许磷钨酸溶液纠正;如染色均为蓝色或绿色,可以加少许饱和碳酸锂溶液纠正。对于改良EA染液,每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳;染液使用更持久。
  

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