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有了这些资料,使用DAB染色液会更轻松
发布时间:2022-10-28   点击次数:64次
  DAB染色液运用还原态无色亚甲蓝则在病变细胞内Fe2+强烈催化下,迅速被细胞内广泛存在的活性氧氧化,变为有色的氧化态亚甲基蓝。目前,DAB染色液用于免疫组化染色,应用在Dako自动染色系统上。

  原理:细胞颗粒中的过氧化物酶,能将过氧化氢中的氧释放出来,氧化二氨基联苯胺,形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。

 

  DAB染色液的使用方法:
  1.DAB显色液配制:10mM Tris-HCl(pH7.6)9mL +DAB(diaminobezidin3,3-二氨基联苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2 或CoCl2 1mL,显色时加入5-10mL 30%H2O2混匀后立即使用;
  2.显色:准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤;
  3.加入适量的DAB显色液,铺满整个固相膜表面。
  4.置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分 钟,避免光照,直至棕褐色沉淀出现。
  5.用镊子夹起固相膜,放进无离子水里清洗。
  6.空气中晾干。
  7.拍照记录 。

  DAB染色液的注意事项:
  1.DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶溶解再行使用;
  2.显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用;
  3.DAB在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因DAB分解影响实验,或因渗漏造成实验环境污染;
  4.DAB有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。

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