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News有了这些资料，使用DAB染色液会更轻松
更新时间：2022-10-28 点击次数：784次
DAB染色液运用还原态无色亚甲蓝则在病变细胞内Fe2+强烈催化下，迅速被细胞内广泛存在的活性氧氧化，变为有色的氧化态亚甲基蓝。目前，DAB染色液用于免疫组化染色，应用在Dako自动染色系统上。
原理：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
DAB染色液的使用方法：
1.DAB显色液配制：10mM Tris-HCl(pH7.6)9mL +DAB(diaminobezidin3，3-二氨基联苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2 或CoCl2 1mL，显色时加入5-10mL 30%H2O2混匀后立即使用；
2.显色：准备好含有待测蛋白的固相膜：包括电泳、转印、封阻、一抗处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤；
3.加入适量的DAB显色液，铺满整个固相膜表面。
4.置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分 钟，避免光照，直至棕褐色沉淀出现。
5.用镊子夹起固相膜，放进无离子水里清洗。
6.空气中晾干。
7.拍照记录 。
DAB染色液的注意事项：
1.DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶溶解再行使用；
2.显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用；
3.DAB在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染；
4.DAB有潜在致突变作用，操作时应注意穿戴好防护用具。
