DAB染色液也叫二氨基联苯胺法，用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺(DAB)，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
 

　　DAB染色液的操作流程：
 

　　1、烤片56-60度2h。
 

　　2、二甲苯60度至少20min100%酒精5min90%酒精5min；80%酒精5min70%酒精5min蒸馏水5min。
 

　　3、微波修复：将玻片加入枸橼酸钠缓冲液的烧杯内，微波加热<中高火7min，停2min，再高温2min，切不可高温拿出，慢慢冷却>。
 

　　4、洗后，切片放入湿盒，滴加3%H2O2，常温孵10min，PBS洗3*5min。
 

　　5、用5%羊血清(PBS配)，37℃，封闭30min。
 

　　6、滴一抗(PBS+0.5%triton配)，37℃孵2h或4℃过夜。
 

　　7、第二天取出，PBS洗3*5min。加B液37℃，30min→洗3*5min。
 

　　8、加C液37℃，30min，PBS洗3*5min。
 

　　9、配制DAB显色剂，切片上滴加DAB显色液，镜下控制显色时间，1~10min，流水终止反应。
 

　　10、苏木素复染，约5-10min，盐酸酒精分化约数秒，用自来水缓慢冲约20min，蓝化。
 

　　11、脱水10-20min<直接放在烘箱里烤干>，二甲苯透明10min。
 

　　12、中性树胶封片，烤片至黏稠。
 

　　13、显微镜下观察，拍照。

　　DAB染色液的注意事项：
 

　　1、显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。
 

　　2、DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶*溶解再行使用。
 

　　3、DAB在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染。
 

　　4、DAB有潜在致突变作用，操作时应注意穿戴好防护用具。