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了解DAB染色液是如何进行操作的?
发布时间:2019-02-01   点击次数:873次
  DAB染色液也叫二氨基联苯胺法,用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理:细胞颗粒中的过氧化物酶,能将过氧化氢中的氧释放出来,氧化二氨基联苯胺(DAB),形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
 
  DAB染色液的操作流程:
 
  1、烤片56-60度2h。
 
  2、二甲苯60度至少20min100%酒精5min90%酒精5min;80%酒精5min70%酒精5min蒸馏水5min。
 
  3、微波修复:将玻片加入枸橼酸钠缓冲液的烧杯内,微波加热<中高火7min,停2min,再高温2min,切不可高温拿出,慢慢冷却>。
 
  4、洗后,切片放入湿盒,滴加3%H2O2,常温孵10min,PBS洗3*5min。
 
  5、用5%羊血清(PBS配),37℃,封闭30min。
 
  6、滴一抗(PBS+0.5%triton配),37℃孵2h或4℃过夜。
 
  7、第二天取出,PBS洗3*5min。加B液37℃,30min→洗3*5min。
 
  8、加C液37℃,30min,PBS洗3*5min。
 
  9、配制DAB显色剂,切片上滴加DAB显色液,镜下控制显色时间,1~10min,流水终止反应。
 
  10、苏木素复染,约5-10min,盐酸酒精分化约数秒,用自来水缓慢冲约20min,蓝化。
 
  11、脱水10-20min<直接放在烘箱里烤干>,二甲苯透明10min。
 
  12、中性树胶封片,烤片至黏稠。
 
  13、显微镜下观察,拍照。

  DAB染色液的注意事项:
 
  1、显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用。
 
  2、DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用。
 
  3、DAB在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因DAB分解影响实验,或因渗漏造成实验环境污染。
 
  4、DAB有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。

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